支原體是細胞外生存的最小微生物,是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,大小一般在0.2~0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀,分枝狀等多種態(tài)。
從上面那段話我們可以知道:
1. 支原體存在于我們周圍,他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中。
2. 可透過一般的濾膜,所以不要寄希望于過濾可以清除支原體污染的液體。
支原體是一個可以胞外生長的細菌,只要接觸到你的細胞培養(yǎng)過程中的任何東西都會發(fā)生支原體污染。所以細胞培養(yǎng)的每一步均要小心翼翼。
那支原體應(yīng)該怎么預(yù)防呢?
1. 支原體不耐干燥,所以要保證你的細胞間通風是正常工作的,經(jīng)常清洗filter,保持房間干燥整潔。另外所使用的東西在有液體撒出時,及時清理,保證你的瓶子,離心管干燥。
2. 支原體對熱抵抗力差,所以煮沸或高溫均可以殺滅支原體。提示所有的細胞用具都要高壓滅菌,所有廢液都應(yīng)該處理。
3. 對紫外線敏感,所以細胞間要定期開紫外線。
4. 支原體易被脂溶劑、清潔劑、常用消毒劑,如酒精、酚、甲醛、來蘇爾等滅活。所以應(yīng)該定期用這些物品清理孵箱,細胞臺。在清理孵箱時不要忘記清理filter。
5. 實驗室應(yīng)該定期殺殺支原體。
因此,在細胞培養(yǎng)過程中,定期監(jiān)測是否存在支原體污染,及時預(yù)防支原體污染是每個科研人員的工作之一。下面筆者給您推薦幾個支原體防控的產(chǎn)品,僅供參考。這些都是德國Minerva Biolabs公司出品,在國際期刊上也具有很高的引用率。
一、環(huán)境中的支原體污染的預(yù)防和清除
Mycoplasma OffTM是一款支原體噴霧劑,用于清除工作區(qū)域中的支原體。它起效快(10秒鐘即起效),安全無毒,對細胞不會產(chǎn)生不良影響,噴灑后,可再用干凈紙張擦拭即可。對于工作臺以及各種細胞操作的器具表面,均可使用。如果是需要避免沾染液體的電子設(shè)備,可使用Mycoplasma OffTM濕巾擦拭。
細胞孵箱、水浴鍋等有溫水的地方,也容易滋生支原體、細菌等。在循環(huán)水中倒入Water ShieldTM(1:200稀釋)即可有效地預(yù)防滋生,效果可持續(xù)1個月左右。
Mycoplasma OffTM對許多細菌、病毒也有預(yù)防和殺滅作用。
二、細胞培養(yǎng)中支原體污染的祛除
通常來說,被污染的細胞應(yīng)該丟棄,以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞,可使用Minerva Biolabs公司的Mynox®或Mynox Gold®。以往別的品牌的支原體清除劑,其實只是抑制劑,它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成,但無法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌,可與支原體膜特異性結(jié)合,破壞膜通透性,導(dǎo)致支原體膨脹破裂而死。使用Mynox®一般在2-3個小時即可完成清除任務(wù)。
Mynox Gold®是Mynox®的升級版,它通過四個療程產(chǎn)生作用。每個療程即細胞傳一代。它除了包括Mynox®,也包含復(fù)合抗生素成分。以往別的品牌的支原體清除劑只是針對支原體的抗生素成分,但也容易產(chǎn)生耐藥。Mynox Gold®將Mynox®和抗生素結(jié)合,即結(jié)合了二者的優(yōu)點,又去除了二者的不足,因為有的細胞對Mynox®的治療不太適應(yīng),而Mynox Gold®要比Mynox®更加溫和,對細胞的毒性效應(yīng)極小,因而更適用于脆弱的不太好養(yǎng)的細胞。
三、細胞培養(yǎng)中支原體污染的預(yù)防
Zell ShieldTM直譯過來是細胞盾pai,它不僅能殺菌,還可抑制支原體的蛋白和DNA合成,因而能避免支原體的污染。使用時按1:100的比例加到培養(yǎng)基中,即可使用。它是復(fù)合抗生素成分,支原體耐藥的出現(xiàn)幾率很低。
四、細胞培養(yǎng)中支原體污染的監(jiān)測
可使用MB公司出品的Venor® Gem系列,常用的是一步法試劑盒(Venor® Gem OneStep),它采用靈敏的PCR方法,能識別常見的至少二十七種支原體。所有試劑均在一管內(nèi),為穩(wěn)定的凍干粉形式,用緩沖液溶解后可直接使用。細胞上清取2l即可完成支原體的篩查。
總之,支原體雖然發(fā)生率高,但可放可控。以上僅僅列舉的是實驗室的情況,對于生物制藥企業(yè),如果是病毒液中發(fā)現(xiàn)支原體的污染,也可以采用Mynox®進行清除??傊гw的檢測和預(yù)防已成為一項常規(guī)操作,這對保障細胞學實驗的順利進行,是非常重要的。