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內(nèi)毒素對細胞有什么危害?

更新時間:2022-12-06  |  點擊率:729

我們常說,細胞培養(yǎng)過程中,在選購血清的時候,一定要看檢測報告,關(guān)注上面一些很重要的指標。比如病毒、內(nèi)毒素這些。

不難理解,血清中如果有:病毒存在,不僅細胞養(yǎng)不好,實驗人員的安全也會受到威脅。

那這血清中內(nèi)毒素的高低對細胞培養(yǎng)會有啥影響啊?為什么選血清要選內(nèi)毒素含量低的呢?

所以今天我們就來聊聊,細胞培養(yǎng)中血清的內(nèi)毒素問題。

內(nèi)毒素是個啥?

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分,叫做脂多糖。脂多糖對宿主是有毒性的。內(nèi)毒素只有當細菌死亡溶解或用人工方法破壞后才釋放出來,所以叫做內(nèi)毒素。

人體對細菌內(nèi)毒素極為敏感。

極微量(1-5ng/kg,而1ng≈2.5EU)內(nèi)毒素就能引起體溫上升,發(fā)熱反應(yīng)持續(xù)約4小時后逐漸消退。

自然感染時,因革蘭氏陰性菌不斷生長繁殖,同時伴有陸續(xù)死亡、釋出內(nèi)毒素,故發(fā)熱反應(yīng)將持續(xù)至體內(nèi)病原菌全部消滅為止。

內(nèi)毒素引起發(fā)熱反應(yīng)的原因是內(nèi)毒素作用于體內(nèi)的巨噬細胞、中性粒細胞等,使之產(chǎn)生IL-1、IL-6和TNF-α等細胞因子,這些細胞因子作用于宿主下丘腦的體溫調(diào)節(jié)中樞,促使體溫升高發(fā)熱。

由于內(nèi)毒素是細菌死亡裂解或自溶引起的,因此環(huán)境中大量存在內(nèi)毒素。但是如果在細胞培養(yǎng)過程中,出現(xiàn)了大量內(nèi)毒素,可不是一件好事。

內(nèi)毒素對細胞有啥影響?

此前,有人做過實驗,來觀察內(nèi)毒素對細胞培養(yǎng)的影響,記錄的影響包括:刺激白細胞培養(yǎng)物產(chǎn)生組織因子、激活鼠巨噬細胞,以及通過極低水平(低于 1 ng/ml)的內(nèi)毒素抑制鼠類紅細胞集落形成等一系列指標。

隨后,發(fā)表了許多關(guān)于內(nèi)毒素對體外細胞功能和生長影響的論文。

細胞種類濃度(ng/mL)內(nèi)毒素的效應(yīng)

馬巨噬細胞0.5誘導(dǎo)產(chǎn)生 IL-6

人體外受精胚胎細胞1體外受精成功率降低了 3-4 倍

主動脈內(nèi)皮細胞10硫酸肝素蛋白聚糖出現(xiàn)劑量依賴性改變

鼠 B 淋巴瘤10免疫球蛋白輕鏈的產(chǎn)量增加 30-40 倍

重組CHO細胞10改變蛋白質(zhì)生產(chǎn)

心肌細胞10誘發(fā)收縮功能障礙

人T細胞100在單核細胞存在下誘導(dǎo)增殖和淋巴因子產(chǎn)生

尿道上皮細胞5000改變克隆效率

Morris等人發(fā)現(xiàn),只需暴露 6 小時,低至 0.5 ng/mL 的內(nèi)毒素水平可以顯著增加馬腹膜巨噬細胞中IL-6的產(chǎn)生。Mattern等人發(fā)現(xiàn), 100 ng/mL 內(nèi)毒素可以刺激人類 T 細胞的增殖及其淋巴因子的產(chǎn)生,但這種刺激需要與先前暴露于內(nèi)毒素的單核細胞直接物理接觸。Sibley等人報道,10 到 200 ng/mL 內(nèi)毒素刺激鼠 B 細胞腫瘤細胞系 (70Z/3) 完成 IgM 的產(chǎn)生,然后在細胞表面表達。

基于上述證據(jù),很明顯,內(nèi)毒素對每種細胞的影響是不一樣。接下來我們就看看產(chǎn)生這些影響的機制有哪些。

內(nèi)毒素對細胞有啥影響?

關(guān)于內(nèi)毒素與細胞培養(yǎng)物相互作用的機制仍有很多未知。

有一些研究報道:

在血清中發(fā)現(xiàn)了一種 60 kDa 的糖蛋白 LPS 結(jié)合蛋白 (LBP),它通過脂質(zhì) A 結(jié)構(gòu)域與 LPS 結(jié)合,大大增強了與免疫系統(tǒng)細胞相互作用的能力。這種增強似乎需要特定的 55 kDa 糖蛋白受體來輔助配合。這種蛋白可以膜錨定再多種免疫細胞上,當與 LPS-LBP 結(jié)合時,會啟動一系列事件,導(dǎo)致細胞因子 mRNA 的產(chǎn)生和隨后細胞釋放多種細胞因子,但細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)究竟是如何發(fā)生的尚不全部清楚。

LPS 也可能通過其他方式與細胞相互作用。一些缺乏 CD14 受體的細胞已被證明可以受到 LPS 的影響。LPS 可能通過未知受體、內(nèi)吞作用或直接進入細胞膜進入細胞 。Risco 等人證明 LPS 可以與細胞骨架微管結(jié)合,并在高濃度下抑制微管聚合。這種結(jié)合是LPS 的某些細胞毒性作用的一種可能機制,但作用似乎不涉及細胞因子激活。

從現(xiàn)有的研究可以看出,內(nèi)毒素對于細胞培養(yǎng)影響還是很大的:

改變細胞外形

活化細胞,產(chǎn)生訊息傳遞物質(zhì)

抑制酶活性

抑制人工受精的成功率等

內(nèi)毒素過高,有事甚至會直接改變我們的實驗結(jié)果。所以要盡量避免內(nèi)毒素的干擾。

一般來說,細胞或組織培養(yǎng)過程中內(nèi)毒素污染源通常來自于血清、培養(yǎng)液及外加藥物配制用水等。

所以選擇內(nèi)毒素含量低的血清就顯得尤為重要。

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