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支原體污染清除劑的作用機(jī)制是怎么樣的?

更新時(shí)間:2024-11-21  |  點(diǎn)擊率:153
  支原體污染清除劑的作用
  支原體是一類無(wú)細(xì)胞壁、能夠通過(guò)常規(guī)濾器的小型原核生物。它們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中是一個(gè)常見(jiàn)的污染源,且因其體積微小和缺乏細(xì)胞壁,傳統(tǒng)的抗生素和過(guò)濾方法往往對(duì)其無(wú)效。支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞的生理、生化特性產(chǎn)生顯著影響,進(jìn)而影響研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。因此,開(kāi)發(fā)有效的支原體清除劑顯得尤為重要。
  主要作用機(jī)制是通過(guò)抑制支原體DNA回旋酶的活性,進(jìn)而抑制其DNA復(fù)制。DNA回旋酶是微生物DNA復(fù)制過(guò)程中的酶類,通過(guò)抑制這種酶,支原體清除劑能夠有效地阻止支原體的增殖和傳播。一些清除劑還具有廣譜抗菌作用,能夠同時(shí)清除細(xì)胞培養(yǎng)中的其他常見(jiàn)細(xì)菌。
  支原體污染清除劑的特點(diǎn)
  高效性:支原體清除劑能夠在短時(shí)間內(nèi)(通常為3-7天)有效地清除細(xì)胞內(nèi)外的支原體污染。這一特點(diǎn)使得研究人員能夠在較短的時(shí)間內(nèi)恢復(fù)細(xì)胞的正常生長(zhǎng)狀態(tài)。
  低毒性:大多數(shù)支原體清除劑對(duì)細(xì)胞的毒性較低,可以在不影響細(xì)胞正常生長(zhǎng)的情況下使用。這對(duì)于那些對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求較高的實(shí)驗(yàn)尤為重要。
  廣譜性:除了支原體,許多清除劑還對(duì)常見(jiàn)的革蘭氏陰性和陽(yáng)性菌具有清除作用。這意味著它們可以替代傳統(tǒng)的雙抗(青霉素和鏈霉素),提供更廣泛的抗菌保護(hù)。
  預(yù)防作用:一些支原體清除劑不僅能夠清除現(xiàn)有的污染,還具有預(yù)防支原體再次污染的功能。這通過(guò)在培養(yǎng)基中添加一定濃度的清除劑來(lái)實(shí)現(xiàn),能夠有效降低環(huán)境污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響。
  無(wú)耐藥性:支原體清除劑的活性成分通常是多肽類物質(zhì),這類物質(zhì)不易導(dǎo)致支原體產(chǎn)生耐藥性。相比之下,傳統(tǒng)抗生素由于長(zhǎng)期使用,容易導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生。
  支原體污染清除劑的使用方法
  配制和稀釋:根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)胞的特性,將支原體清除試劑配制成相應(yīng)的培養(yǎng)基。通常建議現(xiàn)配現(xiàn)用,以確保試劑的有效性。推薦的稀釋比例為1:1000,即在10mL的培養(yǎng)基中加入10µL支原體清除劑。
  細(xì)胞處理:棄掉舊的培養(yǎng)基,用PBS(磷酸鹽緩沖液)將細(xì)胞清洗干凈,然后加入含有支原體清除劑的新鮮培養(yǎng)基。每天更換一次含有清除劑的培養(yǎng)基,連續(xù)處理3天;或者每?jī)商旄鼡Q一次,連續(xù)處理5-6天。
  后續(xù)維護(hù):處理完畢后,加入新鮮培養(yǎng)基,并可添加支原體預(yù)防劑以防止再次污染。為了維持清除效果,后期可按照1:2000~1:5000的比例稀釋后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。
  檢測(cè)和驗(yàn)證:處理15日后,可以使用支原體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè),確認(rèn)支原體是否已被清除。定期進(jìn)行支原體檢測(cè)也是防止再次污染的重要措施。
  應(yīng)用領(lǐng)域
  支原體清除劑廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,特別是在那些對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求較高的研究領(lǐng)域,如癌癥研究、干細(xì)胞研究、分子生物學(xué)研究等。它也適用于生產(chǎn)生物制品,如疫苗、單克隆抗體等,確保產(chǎn)品的純凈性和安全性。
  
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