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「細(xì)胞質(zhì)控」助力高質(zhì)量細(xì)胞培養(yǎng)——Ausbian特級胎牛血清

更新時間:2022-11-30  |  點擊率:722

人有生老病死,細(xì)胞也是如此。在細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中,細(xì)胞的活力和狀態(tài)是處于一種動態(tài)變化的狀態(tài)。

脫離機體保護的細(xì)胞,往往是很脆弱的,在體外環(huán)境中生長,培養(yǎng)條件的輕微改變,或許就會令細(xì)胞發(fā)生不可預(yù)估的變化。就比如,常見的原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中,即使保持培養(yǎng)條件并未發(fā)生改變,但在傳代過程中,細(xì)胞質(zhì)量也經(jīng)常是呈下降趨勢的。

細(xì)胞質(zhì)量改變,勢必會影響實驗結(jié)果。因此,對細(xì)胞質(zhì)量進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋O(jiān)控,有助于掌握細(xì)胞狀態(tài),對其能否進(jìn)行后續(xù)實驗做出合理的預(yù)判。

細(xì)胞質(zhì)控

傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng),主要是通過在顯微鏡下,觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,以及傳代培養(yǎng)周期的變化,來判斷細(xì)胞狀態(tài)。這種判斷方法雖然便捷,但是由于比較主觀,誤差較大,也無法量化,或是進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

體外細(xì)胞的有效培養(yǎng)新概念——“細(xì)胞質(zhì)控",可以通過細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖及DNA損傷等五方面對細(xì)胞生長生存狀態(tài)進(jìn)行全面的監(jiān)控。

在體外細(xì)胞培養(yǎng)的過程中,細(xì)胞總有一些因各種原因而死亡,總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比,即是我們常說的細(xì)胞活力。細(xì)胞活力是“細(xì)胞質(zhì)控"中比較基礎(chǔ)的指標(biāo)。常見的流式細(xì)胞設(shè)備及部分細(xì)胞計數(shù)儀器都可以對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù),也可以提供準(zhǔn)確客觀的細(xì)胞活力數(shù)據(jù),為“細(xì)胞質(zhì)控"提供準(zhǔn)確、客觀的統(tǒng)計學(xué)依據(jù)。

細(xì)胞活力檢測注意事項

檢測細(xì)胞活力時,需保證正常細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的。

核酸染料,如PI(Propidium iodide,碘化丙啶)常用于流式細(xì)胞儀分析。細(xì)胞在處于壞死或即將死亡的細(xì)胞細(xì)胞膜常處于受損狀態(tài),由于PI不能通過正常完整的細(xì)胞膜,因此,細(xì)胞活力不佳的細(xì)胞,PI可將其染成紅色,用于分辨壞死細(xì)胞/正常細(xì)胞。

如果染色時再加入另一種能夠通過細(xì)胞膜的核酸染料,就可以將活細(xì)胞和死細(xì)胞區(qū)分開。

例如,PI經(jīng)常被用來與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用,區(qū)別活力不同細(xì)胞。

細(xì)胞活力檢測的其他應(yīng)用

除了對細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)的質(zhì)量檢測,細(xì)胞活力測定還有其他更廣泛的應(yīng)用。

例如,細(xì)胞活力是細(xì)胞毒性實驗的指標(biāo)之一。判斷某種外源成分(化合物、小分子藥物或蛋白質(zhì)等)對細(xì)胞是否存在毒性或毒性的高低,首先要觀察的,就是該成份是否會誘導(dǎo)細(xì)胞死亡,也就是細(xì)胞活力的變化。

另外,除了細(xì)胞毒性研究,細(xì)胞質(zhì)控在病毒感染或者RNA轉(zhuǎn)染的研究中發(fā)揮著重要作用。轉(zhuǎn)染/感染所用的試劑,或多或少會對細(xì)胞產(chǎn)生一定的負(fù)面影響。因此,在轉(zhuǎn)染之前,活細(xì)胞需要達(dá)到一定的比例才可以保證在轉(zhuǎn)染實驗的順利進(jìn)行。

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1、提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。

2、提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

3、有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。

4、是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

5、起酸堿度緩沖液作用。

6、提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細(xì)胞不受傷害。

7、參與細(xì)胞凍存。

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